總RNA提取試劑（trizol）

產(chǎn)品描述

總 RNA 提取試劑 （trizol）（下文簡稱“trizol"）的主要成分是異硫氰酸胍，它可以破壞細(xì)胞，使細(xì)胞RNA釋放出來，同時(shí)保護(hù)RNA的完整性，因此，常用于動(dòng)植物細(xì)胞RNA的提取。

訂購信息

運(yùn)輸與保存

常溫運(yùn)輸。4℃避光保存，有效期12個(gè)月。

使用方法

1.       準(zhǔn)備樣品

l  組織樣品：液氮研磨組織法，組織塊直接放入研缽中，加入少量液氮，迅速研磨，待組織變軟，再加少量液氮，再研磨，如此三次后，按組織樣品質(zhì)量與trizol體積按照50~100 mg/mL加入，勻漿。【注】：組織體積不能超過trizol體積的10%， 否則勻漿效果不好，用電動(dòng)勻漿器勻漿約需1~2 min 。

l  細(xì)胞：培養(yǎng)貼壁細(xì)胞不須消化，可直接用trizol進(jìn)行消化及裂解，trizol體積按10 cm2/mL比例加入；懸浮細(xì)胞可直接收集，消化裂解，每1 mL trizol可裂解 5×10⁶動(dòng)物、植物或酵母細(xì)胞，或1×10⁷細(xì)菌細(xì)胞。

2.       細(xì)胞或組織加trizol后，室溫放置5 min,使其充分裂解。【注】：此時(shí)可放入﹣70℃ 長期保持。

3.       12,000g離心5 min,棄沉淀。

4.       按200 μL氯仿/mL trizol加入氯仿，振蕩混勻后室溫放置15 min。【注】：禁用漩渦振蕩器，以免基因組DNA斷裂。

5.       4℃ 12,000g離心15 min 。

6.       吸取上層水相，至另一離心管中。【注】：千萬不要吸取中間界面:若同時(shí)提取DNA和蛋白質(zhì)，則保留下層酚相存于4℃ 冰箱，若只提RNA,則棄下層酚相。

7.       0.5mL異丙醇/mL trizol加入異丙醇混勻，室溫放置5~10 min 。

8.       4℃ 12,000g離心10 min, 棄上清，RNA沉于管底。

9.       按1 mL 75%乙醇/mL trizol加入75% 乙醇，溫和振蕩離心管，懸浮沉淀。

10.   4℃ 8,000g 離心5 min, 盡量棄上清液。

11.   室溫晾干或真空干燥5~10 min。【注】：RNA樣品不要過于干燥，否則很難溶解。

12.   可用50 μL H₂O、TE buffer或0.5% SDS溶解RNA樣品，55~60℃ ,5~10 min。【注】：H₂O、TE buffer或0.5% SDS均須用DEPC處理并高壓。

注意事項(xiàng)

1.       本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

2.       操作人員應(yīng)經(jīng)過專門培訓(xùn)，嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。

3.       操作處置應(yīng)在具備局部通風(fēng)或全面通風(fēng)換氣設(shè)施的場所進(jìn)行。

4.       避免眼和皮膚的接觸，避免吸入蒸汽。

5.       遠(yuǎn)離火種、熱源，工作場所嚴(yán)禁吸煙。

6.       整個(gè)提RNA過程需要無RNase的實(shí)驗(yàn)用具。

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